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Celular Imaging & Análise

Resumo:

A tecnologia SNAP e CLIP-tag permitem a marcação específica e covalente de praticamente qualquer molécula fluorescente a uma proteína de interesse. Há duas etapas para o uso deste sistema: a clonagem e expressão da proteína de interesse com uma SNA-tag fusion ®, e a marcação com o substrato para a tag. O SNAP-tag é uma pequena proteína com base na O6-alkylguanine-DNA-Alquiltransferase (hAGT) humana, uma proteína de reparo do DNA. Os fluorófors conjugados às SNAP-tag são corantes ligados diretamente  a guanina ou cloropirimidina deixando grupos através de um linker benzílico. Na reação de marcação, o grupo benzil do substrato é covalentemente ligado à  SNAP-tag. CLIP-™tag é uma versão modificada da SNAP-tag, projetados para reagir com benzilcitosina em vez de derivados benzilguanina. Quando usado em conjunto com SNAP-tag, CLIP-tag permite marcação simultânea de duas proteínas em uma célula única.

Células COS-7 transfectadas com pSNAP-tubulina. As células foram marcadas com SNAP-Cell TMR - Pseudo-Star (verde) e contracorados com Hoescht 33342 (azul)

Características:
Clonar e expressar com uma variedade de pigmentos fluorescentes
Protocolos de fácil uso permitem uma rápida marcação
Otimizado para uma ampla variedade de instrumentos
Não-tóxico para as células vivas
Ampla seleção de fluoróforos
Específicos covalente marcação
Marcação simultânea de duas proteínas
Fácil de usar com vários kits disponíveis.

NIH3T3 transfectadas com pSNAP-Actin. As células foram marcadas com SNAP-Cell TMR -  Pseudo-Star (verde) e contracorados com Hoechst 33342 (azul).

Aplicações:
Proteína dupla marcação simultânea no interior de células vivas
Proteína de localização e translocação
Pulse experiências de perseguição
Internalização estudos Receptor
Superfície celular seletiva rotulagem
Proteína pull down assays
Detecção de proteínas em SDS-PAGE
A citometria de fluxo
Alta taxa de transferência obrigatória em todos os testes de placas de microtitulação
Interação experimentos Biosensor
FRET baseada em ensaios de ligação