Engen Sgrna Synthesis Kit. S. Pyogenes

O Kit de Síntese de sgRNA EnGen, S. pyogenes oferece um método simples e rápido para transcrever altas quantidades de sgRNA em uma única reação de 30 minutos, utilizando os reagentes fornecidos e oligos de DNA específicos para o alvo, projetados pelo usuário.

- Geração rápida de quantidades de microgramas de sgRNA
- Fluxo de trabalho completo em menos de uma hora
- Protocolo simples que requer apenas um oligonucleotídeo ssDNA específico do alvo de aproximadamente 55 nucleotídeos
- Para auxílio no design de oligos, utilize o EnGen sgRNA Template Oligo Designer
- Compatível com EnGen Spy Cas9 NLS, EnGen Spy Cas9 Nickase, EnGen Spy dCas9 (SNAP-tag®)

Na natureza, a Cas9 de S. pyogenes é programada com dois RNAs separados: o crRNA e o tracrRNA. O crRNA, ou RNA CRISPR, contém aproximadamente 20 nucleotídeos de homologia complementar à sequência de DNA oposta e a montante de uma sequência PAM (Protospacer Adjacent Motif) (NGG). O tracrRNA, ou RNA crRNA transativador, contém uma sequência parcialmente complementar ao crRNA, além da sequência e estrutura secundária reconhecidas pela Cas9. Essas sequências foram adaptadas para uso em laboratório combinando o tracrRNA e o crRNA em um único RNA guia (sgRNA) capaz de se complexar com a Cas9 para reconhecer e clivar o DNA alvo.

O Kit de Síntese de sgRNA EnGen®, S. pyogenes combina um Oligo Scaffold específico da Cas9 de S. pyogenes (incluído na EnGen 2X sgRNA Reaction Mix) que é parcialmente complementar aos oligos específicos do alvo projetados pelo usuário. Os dois oligos se unem na região sobreposta e são preenchidos pela DNA polimerase, criando um template de DNA de fita dupla (dsDNA) para a transcrição. A síntese do template dsDNA e a transcrição do RNA ocorrem em uma única reação, resultando na geração de um sgRNA funcional.